martes, 29 de mayo de 2012

Determinación de nitratos y nitritos (Reactivo de Griess)


 

Preparación de la muestra.
    Pasar rápidamente 3 veces a través de un molino de alimentos con placas de aproximadamente 3 mm
de abertura, mezclar perfectamente después de cada molienda y comenzar la determinación lo más
rápido posible.

Principio (fundamento del método).
    Este método se basa en la reacción del analito en medio ácido para formar una sal diazonio que
acoplada a aminas aromáticas produce un colorante azo (diazotización de Griess). Esta reacción de color
es monitoreada fácilmente por medio de espectrofotometría.

 Equipo.
    Balanza analítica con sensibilidad de 0,1 mg.
    Espectrofotómetro de ultravioleta visible.    Baño de vapor.
    7.5.2.3 Materiales.
    Matraz volumétrico de 250 mL
    Tubos de Nessler de 50 mL
    Pipetas volumétricas de 2 mL
    Pipetas graduadas de 10 mL
    Vaso de precipitados de 50 mL
 Reactivos.

  •    Reactivo de Griess
    Disolver 0,5 g de ácido sulfanílico en 30 mL de ácido acético glacial y 120 mL de agua destilada. Filtrar si es necesario (guardar en refrigeración). 
     
  • Disolver 0,1 g de N-1-naftiletilendiamina (NED) en 120 mL de agua destilada calentando, enfriar, agregar 30 mL de ácido acético glacial y filtrar (guardar en refrigeración). Si cualquiera de las soluciones se torna colorida, agitar con 0,5 g de zinc en polvo y filtrar. Mezclar ambas soluciones y guardar en frasco ámbar.
  •    Solución saturada de Cloruro de mercurio (HgCl2).
  •     Solución patrón de nitrito de sodio.
     Pesar 0,5 g de Nitrito de sodio (NaNO2) puro, disolver en 1 litro de agua destilada libre de nitritos. Diluir 10 mL de esta solución a un litro con agua destilada (1 mL= 0,005 mg de NaNO2).

    Procedimiento
    Preparación de la curva de comparación.
    En el caso de que se evalúen productos cárnicos curados se preparará la siguiente curva
de calibración:
    En tubos de Nessler de 50 mL o en tubos de ensaye de 60-70 mL, medir solución patrón: 0,0, 0,1, 0,5,
2,0, 4,0, 6,0, 8,0, 10,0, 12,0, 14,0, 16,0, 18,0 mL y llevar a la marca de 50 mL con agua destilada, agregar  2 mL del reactivo de Griess. Mezclar perfectamente y después de 20 minutos, leer en Espectrofotómetro  de ultravioleta visible a 520 nm. Ajustar el cero del instrumento con el blanco. Trazar una curva graficando  concentraciones (en mg de NaNO2) contra absorciones o usar estos patrones para comparar visualmente.
   En el caso de que se evalúen productos cárnicos no curados se preparará la siguiente
curva de calibración:    En tubos de Nessler de 50 mL o en tubos de ensaye de 60-70 mL, medir solución patrón de nitrito de  sodio diluida: 0,0; 0,05; 0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 0,6; 0,8 y 1,0 mL y llevar a la marca de 50 mL con agua  destilada y libre de nitritos, agregar 2 mL del reactivo de Griess. Mezclar perfectamente y después de 20  minutos, leer en Espectrofotómetro de ultravioleta visible a 520 nm. Ajustar el cero del instrumento con el  blanco. Trazar una curva graficando concentraciones (en mg de NaNO2) contra absorciones o usar estos  patrones para comparar visualmente.

 Desarrollo de la prueba.
     Pesar 2 g de muestra preparada como se indica en (Preparación de muestra) en un vaso de
precipitados de 50 mL y agregar aproximadamente 40 mL de agua libre de nitritos y calentada a 80°C,
mezclar perfectamente con un agitador teniendo cuidado de romper todos los grumos, transferir todo el
contenido a un matraz volumétrico de 250 mL, lavar el vaso y el agitador con varias porciones de agua
caliente (160 mL aproximadamente).
    Colocar el matraz en baño de vapor por espacio de 2 horas, agitando ocasionalmente.
Agregar 5 mL de solución saturada de cloruro mercúrico y mezclar. Si hay color añadir menos de 5 g de
carbón vegetal y agitar. Enfriar a temperatura ambiente, diluir a la marca con agua libre de nitritos y
mezclar. Filtrar hasta obtener un filtrado claro, libre de turbidez. Tomar una alícuota de 50 mL en tubos de
Nessler, agregar 2 mL   de reactivo de Griess, mezclar y dejar reposar 20 minutos para desarrollar color. Este color puede leerse  visualmente con su respectiva escala por comparación o bien leer su absorción en un Espectrofotómetro  de ultravioleta visible a 520 nm, ajustando el aparato a cero de transmisión con el blanco de reactivos.
espectrofotometro  

    Expresión de resultados.
    Cálculos.
      mg/kg de NaNO2 = L X 5 X 1000 
                                            PM
En donde:
L = Lectura en curva de NaNO2
PM = Peso de la muestra.

Bibliografía:
http://bibliotecas.salud.gob.mx/gsdl/collect/nomssa/index/assoc/HASH937a.dir/doc.pdf

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